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影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的外在因素及解決方法

更新時(shí)間:2016-07-07      瀏覽次數(shù):1494

信帆生物為大家分享:外源性ELISA結(jié)果出錯(cuò)解決方案:

外源性物質(zhì)干擾解決方案:

外源性物質(zhì)常常是由于用于 ELISA 測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。

(1)標(biāo)本溶血  由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的 ELISA 測(cè)定中,會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色,干擾測(cè)定結(jié)果。為克服上述干擾作用,標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。

(2)標(biāo)本受細(xì)菌污染  因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果(信帆生物)。

(3)標(biāo)本保存不當(dāng)  在冰箱中保存過久的標(biāo)本,血清中 IgG 可聚合成多聚體、AFP 可形成二聚體,在間接法 ELISA 測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性;標(biāo)本放置時(shí)間過長(zhǎng)(如一天以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA 測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測(cè)定,5 天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于 4℃,1 周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,(上海信帆生物)不可強(qiáng)烈振蕩。

(4)標(biāo)本凝集不全  在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后 1/2~2 h 開始凝固,18~24 h *凝固。上海信帆生物提供ELISA樣本收集方法。研究檢驗(yàn)工作中,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在 ELISA 測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;這類情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用,解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>

(5)標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響  抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如 NaN3 可抑制 ELISA 系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對(duì) ELISA 測(cè)定有一定干擾作用。 綜上所述,對(duì)研究檢驗(yàn) ELISA 測(cè)定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果,在考慮試劑因素和操作因素之外,更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除 干擾作用,從而為研究提供正確可靠的檢測(cè)結(jié)果。

上海信帆生物公司主要代理產(chǎn)品:
ELISA試劑盒:進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清:胎牛血清,科研血清,動(dòng)物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品:進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體:一抗,二抗,流式抗體等。
放免試劑盒:進(jìn)口放免試劑盒,國(guó)產(chǎn)放免試劑盒,進(jìn)口美國(guó)鳳凰等放免試劑盒。
實(shí)驗(yàn)室代測(cè)服務(wù):放免代測(cè),WB實(shí)驗(yàn),免疫組化代測(cè),熒光定量PCR代測(cè),病理細(xì)胞染色代測(cè),生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)等。

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